2018年 20卷 第2期
2018, 20(2): 135-145.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0018
摘要:
灰飞虱是中国长江流域和黄淮地区重要的农业害虫，由于杀虫剂的广泛与大量使用，已导致其对多种杀虫剂产生了抗性。深入研究其抗药性分子机制，可为灰飞虱抗性的快速检测和治理提供重要理论基础。文章总结了灰飞虱对毒死蜱、吡虫啉、溴氰菊酯、噻嗪酮、氟虫腈和乙虫腈等杀虫剂的抗性分子机制研究进展，主要包括抗性相关解毒酶和转运蛋白基因的筛选与功能验证，以及靶标位点突变等重要研究成果，指出该研究领域当前存在的问题主要有抗性基因的功能验证及调控路径、抗性新基因的鉴定及交互抗性和多重抗性机制不明确等，并展望了其未来发展方向，认为：可利用CRISPR/Cas9基因编辑技术验证抗性基因功能；可将转录组测序结合生物信息学手段用于鉴定新抗性基因及抗性调控基因，以探明交互抗性和多重抗性机制；应深入至蛋白组学水平探讨抗性机制；需开发配套的高效田间施药技术，以达到杀虫剂减施增效的目的。
灰飞虱是中国长江流域和黄淮地区重要的农业害虫，由于杀虫剂的广泛与大量使用，已导致其对多种杀虫剂产生了抗性。深入研究其抗药性分子机制，可为灰飞虱抗性的快速检测和治理提供重要理论基础。文章总结了灰飞虱对毒死蜱、吡虫啉、溴氰菊酯、噻嗪酮、氟虫腈和乙虫腈等杀虫剂的抗性分子机制研究进展，主要包括抗性相关解毒酶和转运蛋白基因的筛选与功能验证，以及靶标位点突变等重要研究成果，指出该研究领域当前存在的问题主要有抗性基因的功能验证及调控路径、抗性新基因的鉴定及交互抗性和多重抗性机制不明确等，并展望了其未来发展方向，认为：可利用CRISPR/Cas9基因编辑技术验证抗性基因功能；可将转录组测序结合生物信息学手段用于鉴定新抗性基因及抗性调控基因，以探明交互抗性和多重抗性机制；应深入至蛋白组学水平探讨抗性机制；需开发配套的高效田间施药技术，以达到杀虫剂减施增效的目的。
2018, 20(2): 146-152.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0019
摘要:
五氟磺草胺作为苗后除草剂被广泛应用于水稻田中杂草的防除，其对水生植物、陆生植物和土壤微生物群落可能存在潜在风险，因此，对五氟磺草胺在水土环境中的转化规律与归趋开展定量研究，已受到学者们的关注。本文对五氟磺草胺在稻田水土环境中的吸附、降解以及对周围环境影响方面的研究进展进行了综述、归纳和分析。指出目前对五氟磺草胺在土壤中吸附的研究报道较少，尚未见有关其在水土环境中运移方面的研究，同时应加强其对水土环境风险评估的研究。
五氟磺草胺作为苗后除草剂被广泛应用于水稻田中杂草的防除，其对水生植物、陆生植物和土壤微生物群落可能存在潜在风险，因此，对五氟磺草胺在水土环境中的转化规律与归趋开展定量研究，已受到学者们的关注。本文对五氟磺草胺在稻田水土环境中的吸附、降解以及对周围环境影响方面的研究进展进行了综述、归纳和分析。指出目前对五氟磺草胺在土壤中吸附的研究报道较少，尚未见有关其在水土环境中运移方面的研究，同时应加强其对水土环境风险评估的研究。
2018, 20(2): 153-162.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0020
摘要:
为了寻找新型具有抗烟草花叶病毒 (TMV) 作用的化合物，在前期研究工作基础上，以取代苄胺、氨基酸及亚膦酸二烷基酯等为原料，按照由C端向N端依次接肽的合成策略，采用缩合剂O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟膦酸酯 (HBTU) 合成酰胺的方法，获得了18个新型寡肽手性膦酸酯硫脲，其结构均经红外光谱、(1H、13C、31P、19F) NMR及元素分析确证和表征，并首次研究了该类化合物抗TMV活性。结果表明：部分目标物对TMV具有较高治疗作用，其中化合物 5i 、 5j 和 5p 在500 μg/mL时对TMV侵染的活体治疗作用效果分别为52.6%、55.7%和56.1%，接近对照药剂宁南霉素 (55.4%)。值得进一步结构改造和构型优化，并在此基础上进行作用机制研究。
为了寻找新型具有抗烟草花叶病毒 (TMV) 作用的化合物，在前期研究工作基础上，以取代苄胺、氨基酸及亚膦酸二烷基酯等为原料，按照由C端向N端依次接肽的合成策略，采用缩合剂O-苯并三氮唑-四甲基脲六氟膦酸酯 (HBTU) 合成酰胺的方法，获得了18个新型寡肽手性膦酸酯硫脲，其结构均经红外光谱、(1H、13C、31P、19F) NMR及元素分析确证和表征，并首次研究了该类化合物抗TMV活性。结果表明：部分目标物对TMV具有较高治疗作用，其中化合物 5i 、 5j 和 5p 在500 μg/mL时对TMV侵染的活体治疗作用效果分别为52.6%、55.7%和56.1%，接近对照药剂宁南霉素 (55.4%)。值得进一步结构改造和构型优化，并在此基础上进行作用机制研究。
2018, 20(2): 163-168.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0021
摘要:
通过化学与生物活性筛选从土壤中分离得到一株菌株，利用16S rDNA方法将其鉴定为嗜线虫致病杆菌Xenorhabdus nematophila并命名为SN313。采用微生物发酵、液相萃取、柱层析及半制备高效液相色谱等技术，对SN313的发酵液进行分离纯化，得到3个化合物。利用质谱和核磁共振等波谱技术并依据文献数据确定了这3个化合物分别是N-(2-羟基苯基乙酰) 色胺 ( 1 )、吩嗪-1-羧酸 ( 2 ) 和环(脯氨酸-色氨酸) ( 3 )，其中化合物 1 是一个新的β-吲哚基乙胺类衍生物。通过微量稀释法测定了3个化合物对4种植物病原真菌的抑制活性。结果表明：化合物 1 对辣椒疫霉Phytophthoa capsici和番茄灰霉病菌Botrytis cinerea具有明显的抑制作用 (IC50值分别为11.20 μg/mL和28.94 μg/mL)；化合物 2 对番茄灰霉病菌、辣椒疫霉、水稻纹枯病菌Thanatephorus cucumeris和小麦根腐病菌Bipolaris sorokiniana有明显的抑制作用 (IC50 < 40 μg/mL)；化合物 3 对番茄灰霉病菌具有较好的抑制效果 (IC50 = 41.58 μg/mL)。从土壤微生物中获取化合物 2 ，为生物农药申嗪霉素有效成分的天然获取提供了一种新的途径。
通过化学与生物活性筛选从土壤中分离得到一株菌株，利用16S rDNA方法将其鉴定为嗜线虫致病杆菌Xenorhabdus nematophila并命名为SN313。采用微生物发酵、液相萃取、柱层析及半制备高效液相色谱等技术，对SN313的发酵液进行分离纯化，得到3个化合物。利用质谱和核磁共振等波谱技术并依据文献数据确定了这3个化合物分别是N-(2-羟基苯基乙酰) 色胺 ( 1 )、吩嗪-1-羧酸 ( 2 ) 和环(脯氨酸-色氨酸) ( 3 )，其中化合物 1 是一个新的β-吲哚基乙胺类衍生物。通过微量稀释法测定了3个化合物对4种植物病原真菌的抑制活性。结果表明：化合物 1 对辣椒疫霉Phytophthoa capsici和番茄灰霉病菌Botrytis cinerea具有明显的抑制作用 (IC50值分别为11.20 μg/mL和28.94 μg/mL)；化合物 2 对番茄灰霉病菌、辣椒疫霉、水稻纹枯病菌Thanatephorus cucumeris和小麦根腐病菌Bipolaris sorokiniana有明显的抑制作用 (IC50 < 40 μg/mL)；化合物 3 对番茄灰霉病菌具有较好的抑制效果 (IC50 = 41.58 μg/mL)。从土壤微生物中获取化合物 2 ，为生物农药申嗪霉素有效成分的天然获取提供了一种新的途径。
2018, 20(2): 169-177.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0022
摘要:
利用化感物质开发除草剂是目前新型除草剂发展的一个重要方向。高粱素是高粱中分泌的一种化感物质，可对多种杂草的生长表现出显著的抑制作用。高粱烷基间苯二酚合酶 (alkylresorcinol synthase，Sb_ARS) 是高粱素生物合成的关键酶。当以大肠杆菌Escherichia coli作为宿主进行Sb_ARS的胞内表达时，细胞破碎是其中最为费时且最昂贵的步骤之一。本研究通过构建新型双控表达质粒pBM123-ars，实现了Sb_ARS在大肠杆菌BL21 (DE3) 中的温控自裂解异源表达；在此基础上，通过优化诱导表达条件，可获得最高的Sb_ARS酶活力 (相对酶活力为160.04% ± 8.12%) 及最高的裂解率 (82.81% ± 3.14%)。研究结果可为新型除草剂高粱素的生物合成奠定理论基础。
2018, 20(2): 178-184.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0023
摘要:
甲基二磺隆是防除小麦田看麦娘Alopecurus aequalis等禾本科杂草的主要除草剂品种之一，但目前中国山东、江苏及安徽等地已有部分看麦娘种群对其产生了抗性。ALS基因197位点突变是看麦娘对甲基二磺隆产生抗性的重要机理，根据突变型和野生型看麦娘在197位点处碱基序列的不同，本研究设计出了一种衍生性酶切扩增多态性序列(dCAPS)分子标记方法，可用于197位点突变的快速检测。通过在引物D197F序列的3′ 端引入一个错配碱基，扩增所得不同种群看麦娘的ALS片段经限制性内切酶BamH I酶切后表现出多态性：野生敏感型分别产生了200和36 bp的2个条带；纯合突变型因无法被切开，只有236 bp的一个条带；而杂合突变型则同时产生了上述3个条带。该dCAPS检测结果准确、可靠，与经典的整株水平测定结果一致，并且可同时检测197位点上任一形式的突变。研究结果可为看麦娘等禾本科杂草对甲基二磺隆靶标抗性的快速检测提供理论依据。
甲基二磺隆是防除小麦田看麦娘Alopecurus aequalis等禾本科杂草的主要除草剂品种之一，但目前中国山东、江苏及安徽等地已有部分看麦娘种群对其产生了抗性。ALS基因197位点突变是看麦娘对甲基二磺隆产生抗性的重要机理，根据突变型和野生型看麦娘在197位点处碱基序列的不同，本研究设计出了一种衍生性酶切扩增多态性序列(dCAPS)分子标记方法，可用于197位点突变的快速检测。通过在引物D197F序列的3′ 端引入一个错配碱基，扩增所得不同种群看麦娘的ALS片段经限制性内切酶BamH I酶切后表现出多态性：野生敏感型分别产生了200和36 bp的2个条带；纯合突变型因无法被切开，只有236 bp的一个条带；而杂合突变型则同时产生了上述3个条带。该dCAPS检测结果准确、可靠，与经典的整株水平测定结果一致，并且可同时检测197位点上任一形式的突变。研究结果可为看麦娘等禾本科杂草对甲基二磺隆靶标抗性的快速检测提供理论依据。
2018, 20(2): 185-191.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0024
摘要:
为明确粘质沙雷氏菌Serratia marcescens S-JS1与杀虫剂对灰飞虱的联合作用，以及S-JS1对灰飞虱解毒酶和保护酶活性的影响，以灰飞虱3龄若虫为对象，采用喷雾法比较了S-JS1与5种杀虫剂 (螺虫乙酯、噻虫嗪、吡虫啉、啶虫脒和毒死蜱) 单用，以及菌、药混用对灰飞虱的杀虫活性，测定了灰飞虱取食经S-JS1处理的水稻后，虫体内羧酸酯酶 (CarE)、谷胱甘肽-S-转移酶 (GSTs)、过氧化物酶 (POD) 和超氧化物歧化酶 (SOD) 的活性变化。结果表明：粘质沙雷氏菌S-JS1分别与不同浓度杀虫剂混用，均可提高杀虫剂对灰飞虱的致死率。其中，109 cfu/mL的S-JS1与1.25 mg/L的噻虫嗪混用处理3 d，或与25 mg/L的螺虫乙酯混用处理5 d，灰飞虱的死亡率分别为65.58%和76.27%，均显著高于同浓度杀虫剂单用的处理 (噻虫嗪单用时致死率为44.24%，螺虫乙酯为49.22%)，表现为增效作用 (χ2 > 3.84，实测死亡率 – 预期死亡率 > 0)；其他各混用处理均为相加作用 (χ2 < 3.84)。灰飞虱取食经粘质沙雷氏菌处理的水稻苗后12和24 h，其CarE活性与对照组间无显著性差异，GSTs活性呈先降低后升高趋势，POD和SOD活性均低于对照组。研究表明，粘质沙雷氏菌S-JS1可能降低了灰飞虱对杀虫剂的抵抗力。本研究可为探索昆虫病原细菌与杀虫剂间的联合应用提供参考，为灰飞虱的有效防治提供新思路。
为明确粘质沙雷氏菌Serratia marcescens S-JS1与杀虫剂对灰飞虱的联合作用，以及S-JS1对灰飞虱解毒酶和保护酶活性的影响，以灰飞虱3龄若虫为对象，采用喷雾法比较了S-JS1与5种杀虫剂 (螺虫乙酯、噻虫嗪、吡虫啉、啶虫脒和毒死蜱) 单用，以及菌、药混用对灰飞虱的杀虫活性，测定了灰飞虱取食经S-JS1处理的水稻后，虫体内羧酸酯酶 (CarE)、谷胱甘肽-S-转移酶 (GSTs)、过氧化物酶 (POD) 和超氧化物歧化酶 (SOD) 的活性变化。结果表明：粘质沙雷氏菌S-JS1分别与不同浓度杀虫剂混用，均可提高杀虫剂对灰飞虱的致死率。其中，109 cfu/mL的S-JS1与1.25 mg/L的噻虫嗪混用处理3 d，或与25 mg/L的螺虫乙酯混用处理5 d，灰飞虱的死亡率分别为65.58%和76.27%，均显著高于同浓度杀虫剂单用的处理 (噻虫嗪单用时致死率为44.24%，螺虫乙酯为49.22%)，表现为增效作用 (χ2 > 3.84，实测死亡率 – 预期死亡率 > 0)；其他各混用处理均为相加作用 (χ2 < 3.84)。灰飞虱取食经粘质沙雷氏菌处理的水稻苗后12和24 h，其CarE活性与对照组间无显著性差异，GSTs活性呈先降低后升高趋势，POD和SOD活性均低于对照组。研究表明，粘质沙雷氏菌S-JS1可能降低了灰飞虱对杀虫剂的抵抗力。本研究可为探索昆虫病原细菌与杀虫剂间的联合应用提供参考，为灰飞虱的有效防治提供新思路。
2018, 20(2): 192-196.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0025
摘要:
黑斑病是影响白术种植的主要病害之一，2015—2017年从浙江省磐安、天台、新昌和嵊州4地采集、分离得到137株白术黑斑病菌Alternaria alternata，采用菌丝生长速率法检测其对甲基硫菌灵和腐霉利的抗性。结果表明：供试的黑斑病菌群体 (n = 137) 对甲基硫菌灵的高水平抗性频率为77.4%，中等水平抗性频率为22.6%，未检测到敏感菌株；对腐霉利的抗性频率为20.4%，含21株低水平抗性菌株和7株中等水平抗性菌株。7种杀菌剂的室内毒力测定结果表明：咪鲜胺对白术黑斑病菌的活性最高，EC50值为0.15 mg/L。供试的137株白术黑斑病菌对咪鲜胺的EC50值分布在0.05~0.87 mg/L之间，平均EC50值为 (0.29 ± 0.11) mg/L，可作为敏感性基线。
黑斑病是影响白术种植的主要病害之一，2015—2017年从浙江省磐安、天台、新昌和嵊州4地采集、分离得到137株白术黑斑病菌Alternaria alternata，采用菌丝生长速率法检测其对甲基硫菌灵和腐霉利的抗性。结果表明：供试的黑斑病菌群体 (n = 137) 对甲基硫菌灵的高水平抗性频率为77.4%，中等水平抗性频率为22.6%，未检测到敏感菌株；对腐霉利的抗性频率为20.4%，含21株低水平抗性菌株和7株中等水平抗性菌株。7种杀菌剂的室内毒力测定结果表明：咪鲜胺对白术黑斑病菌的活性最高，EC50值为0.15 mg/L。供试的137株白术黑斑病菌对咪鲜胺的EC50值分布在0.05~0.87 mg/L之间，平均EC50值为 (0.29 ± 0.11) mg/L，可作为敏感性基线。
2018, 20(2): 197-203.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0026
摘要:
建立了一种高效液相色谱-电喷雾串联质谱法 (HPLC-ESI-MS/MS) 测定雷公藤提取物中雷公藤甲素 (triptolide)、雷公藤吉碱 (wilforgine) 和雷公藤次碱 (wilforine) 3种活性物质的分析方法，比较了雷公藤不同植株部位和不同组织培养产物中3种活性物质的含量差异。分别采用回流和超声两种方法提取。回流提取中，样品经V (甲醇) : V (乙腈) = 1:1溶液回流，采用Supelclean LC-Si固相萃取小柱净化；超声提取中，样品经乙醇超声，用OASIS HLB固相萃取柱净化。采用C18色谱柱分离，乙腈和水作为流动相进行梯度洗脱，采用HPLC-ESI-MS/MS测定。结果显示：在雷公藤植株中，雷公藤甲素含量最高的是不定根，发状根、根皮中含量次之，茎、叶中含量很少；雷公藤次碱含量最高的是发状根，其次是根皮，叶中未检测出；发状根和根皮中雷公藤吉碱的含量相当。在0.01~2 mg/kg添加水平下，3种活性物质的回收率在81%~109%之间，相对标准偏差 (RSD) 为0.4%~1.8% (n = 5)。检出限在0.08~0.12 μg/mL之间。该方法可以准确、快速地对雷公藤提取物及其产品进行质量监控。
建立了一种高效液相色谱-电喷雾串联质谱法 (HPLC-ESI-MS/MS) 测定雷公藤提取物中雷公藤甲素 (triptolide)、雷公藤吉碱 (wilforgine) 和雷公藤次碱 (wilforine) 3种活性物质的分析方法，比较了雷公藤不同植株部位和不同组织培养产物中3种活性物质的含量差异。分别采用回流和超声两种方法提取。回流提取中，样品经V (甲醇) : V (乙腈) = 1:1溶液回流，采用Supelclean LC-Si固相萃取小柱净化；超声提取中，样品经乙醇超声，用OASIS HLB固相萃取柱净化。采用C18色谱柱分离，乙腈和水作为流动相进行梯度洗脱，采用HPLC-ESI-MS/MS测定。结果显示：在雷公藤植株中，雷公藤甲素含量最高的是不定根，发状根、根皮中含量次之，茎、叶中含量很少；雷公藤次碱含量最高的是发状根，其次是根皮，叶中未检测出；发状根和根皮中雷公藤吉碱的含量相当。在0.01~2 mg/kg添加水平下，3种活性物质的回收率在81%~109%之间，相对标准偏差 (RSD) 为0.4%~1.8% (n = 5)。检出限在0.08~0.12 μg/mL之间。该方法可以准确、快速地对雷公藤提取物及其产品进行质量监控。
2018, 20(2): 204-210.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0027
摘要:
建立了QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱 (UPLC-MS/MS) 同时检测黄瓜和土壤中氰霜唑及代谢物4-氯-5-(4-甲苯基)-1H-咪唑-2-腈 (CCIM) 残留的方法。样品经V (乙酸) : V (乙腈) = 1 : 99混合溶液提取，以XBridge-C18色谱柱 (150 mm × 2.1 mm，3.5 μm) 进行UPLC 分离，采用三重四极杆串联质谱以正离子多重反应监测模式 (MRM) 进行测定。结果表明：在0.005~1 mg/kg范围内，氰霜唑及CCIM的峰面积与其对应的质量浓度间线性关系良好， R2 > 0.999，在0.01、0.05和0.1 mg/kg添加水平下，氰霜唑在黄瓜和土壤中的回收率为84%~95%，相对标准偏差 (RSD) 为1.2%~3.3%；CCIM的回收率为84%~103%，RSD为2.0%~3.9%。氰霜唑在黄瓜和土壤中消解动态符合一级动力学方程，消解较快，在黄瓜和土壤中的半衰期分别为1.7~4.0 d，6.6~9.6 d。该方法样品前处理过程简单快速，分析时间短，灵敏度、准确度及精密度均符合农药残留检测要求，适用于黄瓜中的氰霜唑及CCIM残留的检测。
建立了QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱 (UPLC-MS/MS) 同时检测黄瓜和土壤中氰霜唑及代谢物4-氯-5-(4-甲苯基)-1H-咪唑-2-腈 (CCIM) 残留的方法。样品经V (乙酸) : V (乙腈) = 1 : 99混合溶液提取，以XBridge-C18色谱柱 (150 mm × 2.1 mm，3.5 μm) 进行UPLC 分离，采用三重四极杆串联质谱以正离子多重反应监测模式 (MRM) 进行测定。结果表明：在0.005~1 mg/kg范围内，氰霜唑及CCIM的峰面积与其对应的质量浓度间线性关系良好， R2 > 0.999，在0.01、0.05和0.1 mg/kg添加水平下，氰霜唑在黄瓜和土壤中的回收率为84%~95%，相对标准偏差 (RSD) 为1.2%~3.3%；CCIM的回收率为84%~103%，RSD为2.0%~3.9%。氰霜唑在黄瓜和土壤中消解动态符合一级动力学方程，消解较快，在黄瓜和土壤中的半衰期分别为1.7~4.0 d，6.6~9.6 d。该方法样品前处理过程简单快速，分析时间短，灵敏度、准确度及精密度均符合农药残留检测要求，适用于黄瓜中的氰霜唑及CCIM残留的检测。
2018, 20(2): 211-216.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0028
摘要:
为明确噻虫嗪在节瓜上的残留行为，于2015年在广东和上海两地进行了噻虫嗪在节瓜上的规范田间残留试验，建立了节瓜中噻虫嗪及其代谢物噻虫胺残留量的高效液相色谱-串联质谱 (HPLC-MS/MS) 检测方法。样品用乙腈提取，经氨基固相萃取小柱净化，HPLC-MS/MS 检测，外标法定量。结果表明：噻虫嗪在节瓜上的消解半衰期为4.98~5.84 d；采用25%噻虫嗪水分散粒剂 (WG)，分别按有效成分75和112.5 g/hm2 的剂量于幼果期开始施药，施药2~3次，每次施药间隔期为7~10 d，距最后一次施药后3、5、7 d 采样测定，节瓜中噻虫嗪和噻虫胺的残留量分别为0.010~0.422 mg/kg和 <0.010~0.020 mg/kg。膳食摄入风险初步评估结果显示：其风险商值 (RQ) 为0.044，表明噻虫嗪的长期膳食摄入风险较低。目前中国尚未制定噻虫嗪在节瓜上的最大允许残留限量 (MRL) 标准，根据试验结果，建议中国可将噻虫嗪在节瓜上的MRL值暂定为1 mg/kg。
为明确噻虫嗪在节瓜上的残留行为，于2015年在广东和上海两地进行了噻虫嗪在节瓜上的规范田间残留试验，建立了节瓜中噻虫嗪及其代谢物噻虫胺残留量的高效液相色谱-串联质谱 (HPLC-MS/MS) 检测方法。样品用乙腈提取，经氨基固相萃取小柱净化，HPLC-MS/MS 检测，外标法定量。结果表明：噻虫嗪在节瓜上的消解半衰期为4.98~5.84 d；采用25%噻虫嗪水分散粒剂 (WG)，分别按有效成分75和112.5 g/hm2 的剂量于幼果期开始施药，施药2~3次，每次施药间隔期为7~10 d，距最后一次施药后3、5、7 d 采样测定，节瓜中噻虫嗪和噻虫胺的残留量分别为0.010~0.422 mg/kg和 <0.010~0.020 mg/kg。膳食摄入风险初步评估结果显示：其风险商值 (RQ) 为0.044，表明噻虫嗪的长期膳食摄入风险较低。目前中国尚未制定噻虫嗪在节瓜上的最大允许残留限量 (MRL) 标准，根据试验结果，建议中国可将噻虫嗪在节瓜上的MRL值暂定为1 mg/kg。
2018, 20(2): 217-222.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0029
摘要:
基于分散固相萃取与气相色谱-串联质谱建立了快速检测西瓜和黄瓜中吡唑萘菌胺及其代谢物残留的分析方法。样品经乙腈提取，N-丙基乙二胺 (PSA) 和C18净化，气相色谱-串联质谱 (GC-MS/MS) 测定，多反应检测模式 (MRM) 分析，内标法定量。考察了提取溶剂及吸附剂种类对分析结果的影响，优化了气相色谱-质谱条件。结果表明：在1~500 μg/L范围内，吡唑萘菌胺及其代谢物的质量浓度与对应的峰面积间均呈良好的线性关系，相关系数 (r) 为0.994 3~0.999 9。在0.01、0.1和1 mg/kg 3个添加水平下，吡唑萘菌胺及其代谢物在西瓜中的平均回收率为70%~105%，相对标准偏差 (RSD，n = 5) 为3.4%~13%；在黄瓜中的添加回收率为82%~104%，相对标准偏差 (RSD，n = 5) 为1.3%~9.3%。吡唑萘菌胺及其代谢物的定量限 (LOQ，S/N = 10) 为0.3~0.6 μg/kg，检出限 (LOD，S/N = 3) 为0.1~0.2 ng。该方法简单、高效、快速，满足残留分析的要求，适用于西瓜、黄瓜中吡唑萘菌胺及其代谢物残留的快速检测。
基于分散固相萃取与气相色谱-串联质谱建立了快速检测西瓜和黄瓜中吡唑萘菌胺及其代谢物残留的分析方法。样品经乙腈提取，N-丙基乙二胺 (PSA) 和C18净化，气相色谱-串联质谱 (GC-MS/MS) 测定，多反应检测模式 (MRM) 分析，内标法定量。考察了提取溶剂及吸附剂种类对分析结果的影响，优化了气相色谱-质谱条件。结果表明：在1~500 μg/L范围内，吡唑萘菌胺及其代谢物的质量浓度与对应的峰面积间均呈良好的线性关系，相关系数 (r) 为0.994 3~0.999 9。在0.01、0.1和1 mg/kg 3个添加水平下，吡唑萘菌胺及其代谢物在西瓜中的平均回收率为70%~105%，相对标准偏差 (RSD，n = 5) 为3.4%~13%；在黄瓜中的添加回收率为82%~104%，相对标准偏差 (RSD，n = 5) 为1.3%~9.3%。吡唑萘菌胺及其代谢物的定量限 (LOQ，S/N = 10) 为0.3~0.6 μg/kg，检出限 (LOD，S/N = 3) 为0.1~0.2 ng。该方法简单、高效、快速，满足残留分析的要求，适用于西瓜、黄瓜中吡唑萘菌胺及其代谢物残留的快速检测。
2018, 20(2): 223-231.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0030
摘要:
建立了QuEChERS-液相色谱-质谱联用 (LC-MS/MS) 同时测定铁皮石斛茎和叶中氯虫苯甲酰胺和吡唑醚菌酯残留量的分析方法，并采用该方法研究了这2种农药在铁皮石斛中的消解动态及最终残留量。样品经乙腈提取，用N-丙基乙二胺 (PSA)、C18和石墨化碳 (PC) 净化。正离子电离，多反应监测模式，LC-MS/MS测定，外标法定量。结果表明：在0.10~60 mg/kg添加水平下，氯虫苯甲酰胺在铁皮石斛茎和叶中的平均回收率为74%~90%，相对标准偏差 (RSD) 为3.2%~4.1%；吡唑醚菌酯在铁皮石斛茎和叶中的平均回收率为75%~104%， RSD为1.7%~4.4%。样品中氯虫苯甲酰胺和吡唑醚菌酯的定量限 (LOQ) 均为 0.1 mg/kg。氯虫苯甲酰胺和吡唑醚菌酯在铁皮石斛中消解较慢，120 d时，氯虫苯甲酰胺在铁皮石斛茎和叶中的降解率分别为40%和72%，吡唑醚菌酯在铁皮石斛茎和叶中的降解率分别为80%和94%。吡唑醚菌酯在铁皮石斛叶中的消解半衰期为38.1 d。5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂按有效成分37.5 g/hm2施药1~2次，施药间隔为7 d，当采收间隔期为30 d时，氯虫苯甲酰胺在茎和叶中的残留量均小于3 mg/kg。25%吡唑醚菌酯水分散粒剂按有效成分187.5 g/hm2施药2~3次，施药间隔为7 d，当采收间隔期为90 d时，吡唑醚菌酯在茎和叶中的残留量均小于8 mg/kg。
建立了QuEChERS-液相色谱-质谱联用 (LC-MS/MS) 同时测定铁皮石斛茎和叶中氯虫苯甲酰胺和吡唑醚菌酯残留量的分析方法，并采用该方法研究了这2种农药在铁皮石斛中的消解动态及最终残留量。样品经乙腈提取，用N-丙基乙二胺 (PSA)、C18和石墨化碳 (PC) 净化。正离子电离，多反应监测模式，LC-MS/MS测定，外标法定量。结果表明：在0.10~60 mg/kg添加水平下，氯虫苯甲酰胺在铁皮石斛茎和叶中的平均回收率为74%~90%，相对标准偏差 (RSD) 为3.2%~4.1%；吡唑醚菌酯在铁皮石斛茎和叶中的平均回收率为75%~104%， RSD为1.7%~4.4%。样品中氯虫苯甲酰胺和吡唑醚菌酯的定量限 (LOQ) 均为 0.1 mg/kg。氯虫苯甲酰胺和吡唑醚菌酯在铁皮石斛中消解较慢，120 d时，氯虫苯甲酰胺在铁皮石斛茎和叶中的降解率分别为40%和72%，吡唑醚菌酯在铁皮石斛茎和叶中的降解率分别为80%和94%。吡唑醚菌酯在铁皮石斛叶中的消解半衰期为38.1 d。5%氯虫苯甲酰胺悬浮剂按有效成分37.5 g/hm2施药1~2次，施药间隔为7 d，当采收间隔期为30 d时，氯虫苯甲酰胺在茎和叶中的残留量均小于3 mg/kg。25%吡唑醚菌酯水分散粒剂按有效成分187.5 g/hm2施药2~3次，施药间隔为7 d，当采收间隔期为90 d时，吡唑醚菌酯在茎和叶中的残留量均小于8 mg/kg。
2018, 20(2): 232-238.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0031
摘要:
利用气相色谱-火焰光度检测器 (GC-FPD) 测定了马拉硫磷在西葫芦中的残留量，根据2016年湖南、山东、北京、安徽、山西和黑龙江6地马拉硫磷在西葫芦中的规范性残留试验，对中国各类人群和不同作物中的马拉硫磷进行了膳食风险评估。样品用乙腈提取，丙酮置换乙腈后，GC-FPD检测。结果表明：在0.02~8.0 mg/kg添加水平下，马拉硫磷在西葫芦中的回收率在88%~109%之间，相对标准偏差 (RSD) 为5%，定量限 (LOQ) 为0.02 mg/kg。湖南和山东的消解动态试验结果显示，马拉硫磷的半衰期为2.74~4.65 d，属于易降解农药；6地的最终残留试验结果表明，距最后一次施药3、5、7 d后，西葫芦中马拉硫磷的最终残留量在 < 0.02~0.049 mg/kg之间。针对西葫芦的膳食风险评估结果显示，中国各类人群对马拉硫磷的国家估计每日摄入量 (NEDI) 为0.115~0.207 μg/(kg bw·d)，风险商值 (RQ) 为0.000 4~0.000 7；全膳食暴露风险评估结果显示，马拉硫磷在各类食物中的NEDI值为82.251 μg/(kg bw·d)，RQ值为0.275 1，表明马拉硫磷在西葫芦中的长期膳食摄入风险较低。推荐中国马拉硫磷在西葫芦上的最大残留限量值 (MRL) 为0.1 mg/kg，可确保中国西葫芦的食用安全性。
2018, 20(2): 239-248.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0032
摘要:
在室内模拟雨水冲刷条件下，分别通过荧光显微镜法和高效液相色谱法探究了添加4种自制喷雾助剂AY904-1 (含有40%乙酸乙烯酯-丙烯酸共聚物和10%异构醇聚氧乙烯醚)、AY904-2 (含有30%乙酸乙烯酯-丙烯酸甲酯共聚物和10%异构醇聚氧乙烯醚)、AY904-3 (含有20%乙酸乙烯酯-丙烯酸乙酯共聚物和10%异构醇聚氧乙烯醚) 和AY904-4 (含有10%乙酸乙烯酯-丙烯酸丁酯共聚物和10%异构醇聚氧乙烯醚) 对提高嘧菌酯在玉米叶片表面耐雨水冲刷效果的影响，并测定了喷雾助剂对嘧菌酯药液物理性状及其玉米安全性的影响。结果表明：在室内模拟冲刷试验中，两种检测方法所测结果具有良好的相关性；在嘧菌酯中添加质量分数为0.1%~1.0%的AY904-1和AY904-2以及添加质量分数为0.5%~1.0%的AY904-3和AY904-4均可显著提高嘧菌酯在玉米叶片上的持留量，且助剂的添加量越大，耐冲刷效果越好，其中以AY904-1的效果最好。在嘧菌酯药液中添加4种喷雾助剂，均能降低药液在玉米叶片表面的接触角，但与嘧菌酯药剂对照相比无显著差异。AY904-1和AY904-2的干燥薄膜在水中溶胀度较低，成膜性能较好。将4种喷雾助剂与氯虫苯甲酰胺药液桶混后喷雾，发现其对3个品种玉米均有很高的安全性。
在室内模拟雨水冲刷条件下，分别通过荧光显微镜法和高效液相色谱法探究了添加4种自制喷雾助剂AY904-1 (含有40%乙酸乙烯酯-丙烯酸共聚物和10%异构醇聚氧乙烯醚)、AY904-2 (含有30%乙酸乙烯酯-丙烯酸甲酯共聚物和10%异构醇聚氧乙烯醚)、AY904-3 (含有20%乙酸乙烯酯-丙烯酸乙酯共聚物和10%异构醇聚氧乙烯醚) 和AY904-4 (含有10%乙酸乙烯酯-丙烯酸丁酯共聚物和10%异构醇聚氧乙烯醚) 对提高嘧菌酯在玉米叶片表面耐雨水冲刷效果的影响，并测定了喷雾助剂对嘧菌酯药液物理性状及其玉米安全性的影响。结果表明：在室内模拟冲刷试验中，两种检测方法所测结果具有良好的相关性；在嘧菌酯中添加质量分数为0.1%~1.0%的AY904-1和AY904-2以及添加质量分数为0.5%~1.0%的AY904-3和AY904-4均可显著提高嘧菌酯在玉米叶片上的持留量，且助剂的添加量越大，耐冲刷效果越好，其中以AY904-1的效果最好。在嘧菌酯药液中添加4种喷雾助剂，均能降低药液在玉米叶片表面的接触角，但与嘧菌酯药剂对照相比无显著差异。AY904-1和AY904-2的干燥薄膜在水中溶胀度较低，成膜性能较好。将4种喷雾助剂与氯虫苯甲酰胺药液桶混后喷雾，发现其对3个品种玉米均有很高的安全性。
2018, 20(2): 249-253.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0033
摘要:
为了解广东省菜心炭疽病菌对咪鲜胺的敏感性差异和变化，于2009—2014年从广东省15个县/市菜心产区分离获得105个菜心炭疽病菌菌株，采用菌丝生长速率法测定了其对咪鲜胺的EC50值，并比较了同一年份不同地区菜心炭疽病菌菌株对咪鲜胺的敏感性差异和不同年份间菜心炭疽病菌菌株对咪鲜胺的敏感性变化。结果显示：同一年份菌株间，采自2009年间的菌株对咪鲜胺的敏感性差异最小，敏感性最低地区菌株的平均EC50值是最高地区菌株的1.2倍；采自2014年间的菌株对咪鲜胺的敏感性差异最大，敏感性最低地区菌株的平均EC50值是最高地区菌株的34.9倍；其余年份间的不同地区最大平均EC50值和最小平均EC50值相差9.2~10.4倍。不同年份菌株间，2010年的菌株对咪鲜胺的敏感性最高，平均EC50值为0.052 0 μg/mL；2012年的菌株对咪鲜胺的敏感性最低，平均EC50值为0.259 9 μg/mL；2012—2014年的菌株对咪鲜胺的平均EC50值范围在0.104 5~0.259 9 μg/mL之间，高于2009—2011年的菌株对咪鲜胺的平均EC50值(0.052 0~0.074 3 μg/mL)。2009—2014年广东省田间菜心炭疽病菌菌株对咪鲜胺的敏感性呈降低趋势，存在潜在抗药性风险。
为了解广东省菜心炭疽病菌对咪鲜胺的敏感性差异和变化，于2009—2014年从广东省15个县/市菜心产区分离获得105个菜心炭疽病菌菌株，采用菌丝生长速率法测定了其对咪鲜胺的EC50值，并比较了同一年份不同地区菜心炭疽病菌菌株对咪鲜胺的敏感性差异和不同年份间菜心炭疽病菌菌株对咪鲜胺的敏感性变化。结果显示：同一年份菌株间，采自2009年间的菌株对咪鲜胺的敏感性差异最小，敏感性最低地区菌株的平均EC50值是最高地区菌株的1.2倍；采自2014年间的菌株对咪鲜胺的敏感性差异最大，敏感性最低地区菌株的平均EC50值是最高地区菌株的34.9倍；其余年份间的不同地区最大平均EC50值和最小平均EC50值相差9.2~10.4倍。不同年份菌株间，2010年的菌株对咪鲜胺的敏感性最高，平均EC50值为0.052 0 μg/mL；2012年的菌株对咪鲜胺的敏感性最低，平均EC50值为0.259 9 μg/mL；2012—2014年的菌株对咪鲜胺的平均EC50值范围在0.104 5~0.259 9 μg/mL之间，高于2009—2011年的菌株对咪鲜胺的平均EC50值(0.052 0~0.074 3 μg/mL)。2009—2014年广东省田间菜心炭疽病菌菌株对咪鲜胺的敏感性呈降低趋势，存在潜在抗药性风险。
2018, 20(2): 254-258.
doi: 10.16801/j.issn.1008-7303.2018.0034
摘要:
YB1是从农药厂污水中分离筛选得到的一株对烟嘧磺隆具有较好降解作用的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。为探究YB1对土壤中烟嘧磺隆的降解能力，本研究对YB1固体发酵产物进行了颗粒剂加工，并对菌株载体和保护剂进行了筛选。优化后的YB1颗粒剂的加工方法为：将YB1固体发酵产物与载体活性白土按质量比1:1混合，加入质量分数为3%的保护剂酪氨酸和5%的淀粉进行挤压造粒，所得颗粒剂的有效活菌数为8.75×108 CFU/g。以小麦为指示植物，应用室内盆栽法研究了YB1颗粒剂对土壤中烟嘧磺隆的降解效果。结果表明，1 kg土壤中添加20 g YB1颗粒剂28 d后可将土壤中1 mg/kg的烟嘧磺隆降解至对小麦无明显药害水平。研究结果表明，YB1颗粒剂对含有烟嘧磺隆残留的土壤具有一定的修复能力。
YB1是从农药厂污水中分离筛选得到的一株对烟嘧磺隆具有较好降解作用的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。为探究YB1对土壤中烟嘧磺隆的降解能力，本研究对YB1固体发酵产物进行了颗粒剂加工，并对菌株载体和保护剂进行了筛选。优化后的YB1颗粒剂的加工方法为：将YB1固体发酵产物与载体活性白土按质量比1:1混合，加入质量分数为3%的保护剂酪氨酸和5%的淀粉进行挤压造粒，所得颗粒剂的有效活菌数为8.75×108 CFU/g。以小麦为指示植物，应用室内盆栽法研究了YB1颗粒剂对土壤中烟嘧磺隆的降解效果。结果表明，1 kg土壤中添加20 g YB1颗粒剂28 d后可将土壤中1 mg/kg的烟嘧磺隆降解至对小麦无明显药害水平。研究结果表明，YB1颗粒剂对含有烟嘧磺隆残留的土壤具有一定的修复能力。
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